GABA_A Rβ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403935-ACT

GABRB1 codifica a subunidade β1 do recetor humano GABA_A, um canal de cloreto controlado por ligando que medeia a neurotransmissão inibitória rápida no sistema nervoso central. A incorporação de subunidades β é fundamental para a montagem do recetor, a sua localização sináptica e as propriedades de abertura/fecho do canal que moldam a excitabilidade neuronal e as oscilações das redes neuronais. Através da sinalização GABAérgica, o GABRB1 contribui para processos como a inibição sináptica, a plasticidade e o equilíbrio entre excitação e inibição em circuitos corticais e subcorticais. Alterações na composição ou na expressão das subunidades do recetor GABA_A estão implicadas em fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, sustentando o uso de GABRB1 como um nó mecanístico em estudos de disfunção da sinalização inibitória.

GABAA Rβ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GABRB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GABAA Rβ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GABRB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GABRB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GABAA Rβ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GABRB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GABAA Rβ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GABAA Rβ1 em células tumorais com expressão de GABRB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.