GABA T-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-411007

概要

SLC6A1はヒトのGABAトランスポーター1（GABA T-1）をコードしており、Na⁺/Cl⁻依存性の高親和性形質膜トランスポーターとして、シナプス内およびシナプス外空間からγ-アミノ酪酸（GABA）を回収し、抑制性神経伝達を調節します。GABAの再取り込みを制御することで、GABA T-1は神経細胞の興奮性、シナプスのタイミング、ネットワーク振動に影響を及ぼし、トランスポーター活性を神経伝達物質の循環やイオン共輸送過程と結び付けています。SLC6A1の機能不全は神経発達およびてんかん関連の表現型と関連しており、GABA恒常性の変化は、より広範な大脳皮質回路の不均衡機構にも関与すると考えられています。SLC6A1を実験的に改変することにより、抑制性シグナル伝達、受容体活性化ダイナミクス、ならびに関連する溶質キャリア（SLC）トランスポーターによる代償を、経路レベルで解析する研究が可能になります。

GABA T-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC6A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC6A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC6A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GABA T-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GABA T-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC6A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GABA T-1の機能に不可欠なSLC6A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC6A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GABA T-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGABA T-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC6A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GABA T-1 HDRプラスミド（h）および GABA T-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC6A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC6A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。