Furin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400904-ACT

FURIN codifica a furina, uma convertase de pró-proteínas dependente de cálcio que cliva e ativa diversos precursores proteicos na via secretória, incluindo hormônios, fatores de crescimento, receptores e enzimas modificadoras da matriz. Ao processar substratos na rede trans-Golgi, em endossomos e na superfície celular, a furina influencia vias que regulam a sinalização celular, a diferenciação, a remodelação da matriz extracelular e a secreção regulada. A atividade desregulada de FURIN tem sido associada a alterações na proteostase e à ativação aberrante de eixos de sinalização implicados na biologia do câncer, na inflamação e nos mecanismos de doenças infecciosas. Como um nó central na maturação de pró-proteínas, a furina é frequentemente estudada pelo seu impacto na disponibilidade de receptores e ligantes e na intensidade das vias downstream em modelos de células humanas.

Furin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FURIN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Furin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FURIN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FURIN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Furin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FURIN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Furin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Furin em células tumorais com expressão de FURIN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.