Plasmide CRISPR d'Activation (h) FucT-IV: sc-401795-ACT

FUT4 code l’α(1,3)-fucosyltransférase IV (FucT‑IV), une glycosyltransférase localisée dans l’appareil de Golgi qui catalyse la fucosylation terminale des glycannes afin de générer des épitopes de type Lewis X sur les glycoprotéines et les glycolipides. En modelant l’architecture des glycannes à la surface cellulaire, FucT‑IV influence l’adhésion médiée par les sélectines, le trafic des leucocytes, ainsi que, plus largement, la signalisation dépendante de la glycosylation et la fonction des récepteurs. L’activité de FUT4 contribue à la régulation des interactions des cellules immunitaires et des processus inflammatoires via la modulation de ligands fucosylés. Une expression dérégulée de FUT4 et des profils de fucosylation altérés ont été associés à des phénotypes anormaux d’adhésion et de migration cellulaires et sont fréquemment étudiés dans le contexte de la biologie du cancer et de l’immunopathologie.

FucT-IV Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FUT4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FucT-IV Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FUT4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FUT4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FucT-IV. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FUT4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FucT-IV au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FucT-IV dans les cellules tumorales présentant une expression de FUT4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.