FUCA2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405221-ACT

FUCA2 codifica l’alfa-L-fucosidasi 2, una glicosidasi lisosomiale coinvolta nella degradazione graduale dei glicoconiugati fucosilati, inclusi N-glicani e glicolipidi. Regolando la rimozione del fucosio terminale, FUCA2 contribuisce al turnover dei glicani e influenza processi catabolici più ampi dipendenti dal lisosoma, che si intersecano con il controllo di qualità cellulare e l’omeostasi metabolica. Alterazioni dell’attività fucosidasica e squilibri nella fucosilazione sono stati associati a cambiamenti nelle interazioni cellula–cellula e nella segnalazione correlata al sistema immunitario, rendendo FUCA2 rilevante per studi sul glicometabolismo e sulla biologia dei lisosomi. Vie di glicosilazione deregolate sono frequentemente osservate nei disturbi complessi, a supporto dell’uso di FUCA2 come nodo meccanicistico nella ricerca orientata ai biomarcatori e alla mappatura delle vie biologiche.

FUCA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FUCA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FUCA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FUCA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FUCA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FUCA2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FUCA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FUCA2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FUCA2 nelle cellule tumorali con espressione di FUCA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.