FSHR Double Nickaseプラスミド (h): sc-400899-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- FSHR Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- FSHRダブルニカースプラスミド（h）およびFSHRダブルニカースプラスミド（h2）は、FSHRを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
FSHR Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400899-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FSHR Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400899-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
卵胞刺激ホルモン受容体（FSHR）はGタンパク質共役型受容体で、主に生殖腺の体細胞に発現しています。卵胞刺激ホルモンが結合すると、Gαs／アデニル酸シクラーゼ経路が活性化されてcAMPが増加し、PKA依存的な転写プログラムが作動します。下流では、MAPK/ERKおよびPI3K/AKT経路との協調的なシグナル伝達を介して、ステロイド産生、細胞増殖、分化、生存が調節されます。ヒトの生物学においてFSHRの機能は、卵胞形成および精子形成の制御の中核を担っており、受容体活性を生殖内分泌学やホルモン応答性の細胞状態と結び付けています。FSHRの発現やシグナル伝達の異常は、不妊の表現型、卵巣機能障害、ならびに生殖系研究に関連する内分泌経路の調節異常の文脈で検討されています。
FSHR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FSHR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FSHR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FSHRの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FSHRが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。