FRYL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415428-ACT

ヒトFRYLは、細胞形態や細胞骨格構造の制御に関与するとされる大型の細胞質タンパク質をコードしており、細胞の移動や組織構築を形作る極性やアクチン依存性プロセスとの関連が報告されています。FRYLは、成長と分化を協調させる転写制御プログラムやシグナル伝達ネットワークとも関連づけられており、発生過程やストレス応答における細胞恒常性の維持に役割を果たす可能性が示唆されています。がんやその他の複雑疾患に関するゲノム／トランスクリプトーム研究では、FRYL発現の変化やその制御環境の破綻が観察されており、FRYLが増殖、浸潤、系譜特異的遺伝子発現にどのように影響するかの解明が動機づけられています。比較的研究が進んでいない因子であるFRYLは、ヒト細胞モデルにおける遺伝子制御相互作用や細胞骨格と結び付いた経路をマッピングするうえで有用な結節点となります。

FRYL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FRYLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FRYL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FRYL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFRYL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FRYLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFRYL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFRYL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFRYL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFRYL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。