FRP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402086-ACT

SFRP1 codifica a proteína secretada relacionada ao Frizzled 1 (FRP-1), um modulador solúvel da sinalização Wnt que se liga a ligantes Wnt e pode influenciar a interação com receptores Frizzled. Ao moldar programas transcricionais dependentes de β-catenina, a FRP-1 impacta a proliferação celular, a diferenciação, a dinâmica epitélio–mesênquima e a homeostase tecidual. A expressão alterada de SFRP1 é frequentemente associada à desregulação da atividade da via Wnt/β-catenina na biologia do câncer e a processos de remodelamento implicados em fibrose e em respostas teciduais inflamatórias. Como regulador secretado, a FRP-1 também é relevante para estudos de sinalização parácrina e de crosstalk entre vias impulsionado pelo microambiente.

FRP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SFRP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FRP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SFRP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SFRP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FRP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SFRP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FRP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FRP-1 em células tumorais com expressão de SFRP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.