frizzled-7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420437

Descripción general

Mouse Fzd7 codifica frizzled-7, un receptor de Wnt de siete dominios transmembrana que transduce ligandos Wnt extracelulares en salidas de señalización intracelular. Frizzled-7 regula programas de transcripción dependientes de β-catenina, así como las vías no canónicas de polaridad celular planar y Wnt/Ca²⁺, moldeando la proliferación, la polaridad, la migración y las decisiones de destino celular durante el desarrollo y la homeostasis tisular. La alteración de la señalización de Fzd7 se ha vinculado con un comportamiento desregulado de células madre/progenitoras y con la activación de vías oncogénicas en múltiples modelos experimentales, lo que lo convierte en un punto de entrada útil para diseccionar el control de la red Wnt. En sistemas celulares, la perturbación de Fzd7 se utiliza comúnmente para investigar la especificidad de la señalización Wnt a nivel de receptor y su interacción con procesos asociados a receptores tirosina cinasa y a Hippo/YAP.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO frizzled-7 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fzd7 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fzd7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fzd7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína frizzled-7.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fzd7 para la investigación de la señalización de frizzled-7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Fzd7 críticos para la función de frizzled-7
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fzd7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido frizzled-7 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido frizzled-7 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fzd7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR frizzled-7 (m) y el plásmido HDR frizzled-7 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fzd7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fzd7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.