frizzled-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420437-ACT

O gene Fzd7 de camundongo codifica a frizzled-7, um receptor de WNT com sete domínios transmembrana que acopla ligantes WNT extracelulares a cascatas de sinalização intracelular que controlam a polaridade celular, a proliferação e a diferenciação. A FZD7 participa tanto da sinalização canônica WNT/β-catenina quanto das vias não canônicas de polaridade planar celular e WNT/Ca2+, influenciando programas transcricionais e a dinâmica do citoesqueleto. Em tecidos em desenvolvimento e adultos, a frizzled-7 contribui para a manutenção de células-tronco e progenitoras, transições epitélio–mesênquima e remodelamento tecidual. A sinalização desregulada de Fzd7 é frequentemente estudada no contexto de atividade anômala da via WNT associada à transformação oncogênica, fibrose e microambientes inflamatórios, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de comunicação cruzada entre vias e controle de estados celulares.

frizzled-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fzd7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

frizzled-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fzd7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fzd7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de frizzled-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fzd7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de frizzled-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via frizzled-7 em células tumorais com expressão de Fzd7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.