frizzled-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401590-ACT

FZD7 codifica o frizzled-7, um receptor transmembrana de sete passagens que se liga a ligantes WNT para iniciar a sinalização canônica de β-catenina e as vias não canônicas de polaridade celular planar e WNT/Ca²⁺. Por meio da transdução de sinal dependente de Dishevelled, o FZD7 influencia decisões de destino celular, polaridade, migração e fenótipos semelhantes aos de células-tronco, integrando sinais durante o desenvolvimento e a homeostase tecidual. A desregulação da sinalização FZD7/WNT é frequentemente associada a programas transcricionais oncogênicos, transição epitélio–mesênquima e estados de diferenciação alterados em diversas neoplasias. Por atuar no nível do receptor na ativação da via WNT, o FZD7 é amplamente estudado por sua contribuição para saídas de sinalização específicas do contexto e para o “cross-talk” entre vias.

frizzled-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FZD7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

frizzled-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FZD7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FZD7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de frizzled-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FZD7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de frizzled-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via frizzled-7 em células tumorais com expressão de FZD7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.