FOXP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422896

概要

Foxp3は、フォークヘッド／ウィングドヘリックス型転写因子であるFOXP3をコードしており、マウスにおいて制御性T（Treg）細胞の系譜決定と抑制機能を司るマスター制御因子として機能します。FOXP3は、NFAT、RUNX1、ならびにクロマチン修飾複合体などの因子との相互作用を介して、免疫寛容、サイトカイン恒常性、T細胞活性化の閾値を制御する転写プログラムを統括します。免疫組織では、FOXP3依存的なネットワークが末梢寛容を形成し、炎症反応を抑え、T細胞と抗原提示細胞のクロストークに影響を及ぼします。Foxp3発現やFOXP3活性の破綻は、自己免疫、アレルギー、炎症性疾患モデルに関連する免疫制御の崩壊を研究するための機序的な切り口として広く用いられています。

FOXP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFoxp3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Foxp3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Foxp3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FOXP3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FOXP3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Foxp3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FOXP3の機能に不可欠なFoxp3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Foxp3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FOXP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFOXP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Foxp3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FOXP3 HDRプラスミド（m）および FOXP3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFoxp3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFoxp3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。