Plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXP3 (m): sc-422896

Présentation

Foxp3 code FOXP3, un facteur de transcription de type forkhead/winged-helix qui agit comme régulateur maître de l’engagement de la lignée des lymphocytes T régulateurs (Treg) et de leur fonction suppressive chez la souris. FOXP3 orchestre des programmes transcriptionnels contrôlant la tolérance immunitaire, l’homéostasie des cytokines et les seuils d’activation des lymphocytes T, via des interactions avec des facteurs tels que NFAT, RUNX1 et des complexes de modification de la chromatine. Dans les tissus immunitaires, les réseaux dépendants de FOXP3 façonnent la tolérance périphérique, limitent les réponses inflammatoires et influencent le dialogue entre les lymphocytes T et les cellules présentatrices d’antigènes. La dérégulation de l’expression de Foxp3 ou de l’activité de FOXP3 est largement utilisée comme point d’entrée mécanistique pour étudier les défaillances de la régulation immunitaire pertinentes pour l’auto-immunité, l’allergie et les modèles de maladies inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXP3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Foxp3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Foxp3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Foxp3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FOXP3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Foxp3 pour l'étude de la signalisation de FOXP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Foxp3 essentiels à la fonction de FOXP3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Foxp3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FOXP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FOXP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Foxp3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FOXP3 plasmide HDR (m) et le FOXP3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Foxp3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Foxp3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.