FOXF1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403521-ACT

FOXF1（forkhead box F1）は、間葉系の分化や器官形成を制御するウィングドヘリックス型転写因子をコードしており、特に肺および血管の発生において重要な役割を担います。核内では、FOXF1が細胞移動、細胞外マトリックス（ECM）のリモデリング、ならびに平滑筋／ペリサイトに関連する転写ネットワークを制御する遺伝子プログラムを統合的に調整し、HedgehogやTGF-β経路の活性など発生シグナルからの入力を取り込みます。FOXF1の発現量（ドーズ）の変化や制御機構の破綻は、先天性の肺・血管疾患と関連し、また異常発現は組織リモデリングやがん関連ストローマ生物学といった文脈でも研究されています。これらの特性により、FOXF1は、間葉系細胞の状態遷移および上皮–間葉相互作用を司る転写回路を解析するうえで有用な結節点となります。

FOXF1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOXF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FOXF1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOXF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOXF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FOXF1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOXF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFOXF1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOXF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFOXF1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。