FOXD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420847-ACT

Foxd1 codifica o fator de transcrição da família forkhead box FOXD1, uma proteína nuclear ligante de DNA que regula a especificação de linhagens e o estabelecimento de padrões durante o desenvolvimento embrionário. Em camundongos, o FOXD1 é mais conhecido por seus papéis em progenitores do estroma renal e na nefrogênese, onde coordena programas mesenquimais que influenciam a ramificação ureteral, a remodelação da matriz extracelular e a sinalização epitélio–estroma. A atividade do FOXD1 intersecciona vias centrais do desenvolvimento, incluindo as sinalizações WNT, BMP e TGF-β, para moldar a morfogênese de órgãos e as decisões de destino celular. Redes transcricionais conduzidas por FOXD1, quando desreguladas, são relevantes para anomalias do desenvolvimento e são frequentemente exploradas para estudar mecanismos de diferenciação, ativação estromal associada à fibrose e programas transcricionais oncogênicos dependentes do contexto.

FOXD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Foxd1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Foxd1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Foxd1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Foxd1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXD1 em células tumorais com expressão de Foxd1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.