FOXC2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402351-LAC

FOXC2 (Forkhead box C2) è un fattore di trascrizione della famiglia winged-helix che determina l’identità mesenchimale e regola lo sviluppo linfatico e vascolare, la transizione epitelio–mesenchimale e il rimodellamento del tessuto adiposo. Integra segnali provenienti da vie quali TGF-β/SMAD, Wnt/β-catenina, Notch e PI3K–AKT per controllare reti trascrizionali che governano la migrazione, la dinamica della matrice extracellulare e la plasticità cellulare. Un’espressione deregolata di FOXC2 è stata associata ad alterazioni della linfangiogenesi, a fenotipi metastatici nei tumori solidi e a fenotipi metabolici legati alla differenziazione degli adipociti e alla sensibilità all’insulina. Queste caratteristiche rendono FOXC2 un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale della morfogenesi tissutale, le interazioni stroma–tumore e i circuiti regolatori genici dello sviluppo nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FOXC2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FOXC2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FOXC2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FOXC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FOXC2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FOXC2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.