FNDC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413674-ACT

FNDC1 (contendo domínio tipo III da fibronectina 1) codifica uma proteína citoplasmática caracterizada por motivos semelhantes ao domínio tipo III da fibronectina, implicada na regulação da adesão celular, da organização do citoesqueleto e da transdução de sinais. Associações funcionais descritas relacionam a FNDC1 a processos como migração e proliferação por meio de vias responsivas a fatores de crescimento, incluindo a sinalização PI3K/AKT e MAPK, e à modulação de respostas celulares ao estresse. Alterações na expressão de FNDC1 foram observadas em múltiplos contextos relevantes para doenças, sustentando seu uso como alvo de pesquisa para estudar o redirecionamento de vias e a plasticidade fenotípica. A investigação experimental de FNDC1 pode ajudar a definir como sinais extracelulares são integrados a programas transcricionais e do citoesqueleto em células humanas.

FNDC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FNDC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FNDC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FNDC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FNDC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FNDC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FNDC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FNDC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FNDC1 em células tumorais com expressão de FNDC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.