FMR2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420393

概要

Aff2はFMR2（AF4/FMR2ファミリー・メンバー2としても知られる）をコードしており、神経系における転写調節およびRNA代謝に関与するとされる核内タンパク質である。FMR2はクロマチンに結び付いた遺伝子制御に関連する機能ドメインを有し、神経細胞の分化やシナプス可塑性を形作る活動依存的な遺伝子発現プログラムとも関連付けられている。AFF2/FMR2機能の破綻は、X連鎖知的障害や神経発達表現型と関連することから、認知や行動の基盤となる遺伝子制御機構を研究するうえで重要な標的である。マウスモデルでは、Aff2の改変を通じて、転写制御が神経細胞の成熟、回路機能、ならびに学習・記憶に影響する下流経路とどのように結び付くかを検討できる。

FMR2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAff2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aff2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aff2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FMR2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FMR2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aff2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FMR2の機能に不可欠なAff2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aff2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FMR2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFMR2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aff2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FMR2 HDRプラスミド（m）および FMR2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAff2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAff2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。