Flt-3/Flk-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400218-ACT

FLT3（Flt-3/Flk-2）は、造血前駆細胞に主に発現するクラスIII受容体チロシンキナーゼをコードしており、FLT3リガンドが結合すると、細胞の増殖・生存・分化が促進されます。受容体が活性化されると、下流のPI3K–AKT、RAS–MAPK、JAK–STATシグナル伝達が作動し、骨髄系およびリンパ系の発生を制御する各種のシグナルを統合します。活性化変異や異常発現などを含むFLT3シグナルの破綻は、白血病発症（leukemogenesis）や造血細胞の運命変化との関連で頻繁に研究されています。その結果、FLT3は、ヒト細胞モデルにおいて成長因子受容体シグナル、前駆細胞生物学、そして腫瘍性キナーゼにより駆動されるネットワーク再配線を解析するための、広く用いられる分子学的な足掛かりとなっています。

Flt-3/Flk-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FLT3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Flt-3/Flk-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FLT3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFLT3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Flt-3/Flk-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFLT3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFlt-3/Flk-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFLT3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFlt-3/Flk-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。