FLG/Filaggrin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400644-ACT

FLGはフィラグリン（filaggrin）をコードしており、フィラグリンはケラチノサイトの終末分化過程で産生されるヒスチジンに富むタンパク質で、表皮バリア形成に必須です。プロフィラグリンのプロセシングにより生じるフィラグリン・モノマーは、ケラチン中間径フィラメントを凝集させ、角化被膜（cornified envelope）の組み立てを促進し、角質層構造の維持を支えます。これによりFLGは、角化および表皮分化プログラムと密接に関連づけられます。その後、フィラグリンが分解されることで、天然保湿因子（NMF）成分が生成され、これらが水分量や角質層pHを調節し、プロテアーゼ活性や自然免疫防御にも影響します。機能喪失変異やFLG発現低下は、バリア機能不全および炎症性皮膚表現型への感受性と強く関連しており、FLGは上皮の恒常性やストレス応答を研究するうえで重要な標的です。

FLG/Filaggrin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FLGの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FLG/Filaggrin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FLG 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFLG転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FLG/Filaggrinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFLG遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFLG/Filaggrin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFLG発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFLG/Filaggrin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。