Plasmide CRISPR/Cas9 KO FLAD1 (h): sc-406725

Présentation

FLAD1 code la flavine adénine dinucléotide synthétase 1, une enzyme bifonctionnelle qui catalyse l’adénylation de la FMN pour générer la FAD, un cofacteur rédox essentiel requis par de nombreuses flavoprotéines mitochondriales et cytosoliques. En contrôlant la disponibilité cellulaire en FAD, FLAD1 soutient le métabolisme oxydatif, les réactions de transfert d’électrons, la β‑oxydation des acides gras et, plus largement, l’homéostasie mitochondriale, reliant le métabolisme de la riboflavine dérivée des micronutriments à la production d’énergie et à l’équilibre rédox. Une altération de la synthèse de FAD peut perturber les voies dépendantes des flavoprotéines, modifier la gestion des espèces réactives de l’oxygène et compromettre la capacité bioénergétique. Des données génétiques et fonctionnelles chez l’humain associent une dysfonction de FLAD1 à des erreurs innées du métabolisme des flavines et à des phénotypes de maladies mitochondriales, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du stress métabolique et de la biologie mitochondriale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FLAD1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FLAD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FLAD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FLAD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FLAD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FLAD1 pour l'étude de la signalisation de FLAD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FLAD1 essentiels à la fonction de FLAD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FLAD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FLAD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FLAD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FLAD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FLAD1 plasmide HDR (h) et le FLAD1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FLAD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FLAD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.