FKBPL Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410504-ACT

FKBPL (FK506 binding protein like) codifica um co-chaperone relacionado a imunofilinas que se associa a complexos de HSP90 e contribui para a proteostase e para a sinalização de receptores de esteroides. Tem sido associado à regulação da progressão do ciclo celular, às respostas ao stress celular e à modulação da estabilidade de proteínas em vias que influenciam a proliferação e a diferenciação. Em células humanas, a atividade de FKBPL tem sido estudada em contextos que envolvem sinalização angiogénica e estímulos inflamatórios, com ligações descritas à biologia tumoral e à remodelação vascular. Alterações na expressão de FKBPL foram observadas em diferentes modelos relevantes para doenças, sustentando a sua utilização como um nó mecanístico em estudos de adaptação de sinalização e de regulação do microambiente.

FKBPL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FKBPL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FKBPL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FKBPL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FKBPL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FKBPL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FKBPL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FKBPL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FKBPL em células tumorais com expressão de FKBPL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.