Fis1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-426020-ACT

Fis1（fission 1）は、DRP1依存的なミトコンドリア分裂のアダプターとして機能する外膜タンパク質をコードしており、代謝状態や細胞ストレスに応じてミトコンドリアネットワークの構造形成を担います。Fis1は、ミトコンドリア分裂をオルガネラの分配、マイトファジー、アポトーシスシグナルと協調させることで、生体エネルギー恒常性および活性酸素種（ROS）の制御に影響を与えます。Fis1が関与する分裂—融合バランスの破綻は、ミトコンドリア品質管理の障害や、神経変性、心血管・代謝ストレス、炎症といった状況で観察される細胞機能不全と関連づけられており、生物医学研究において示されています。そのため、マウスFis1は、ミトコンドリア動態経路と、それに続く細胞運命決定への影響を解明するために広く用いられています。

Fis1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Fis1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Fis1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Fis1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFis1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Fis1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFis1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFis1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFis1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFis1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。