fibrillin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420296

概要

マウスのFbn1は、微小線維（マイクロフィブリル）へと集合して弾性線維の足場を形成し、組織の生体力学を調節する主要な細胞外マトリックス糖タンパク質であるフィブリリン-1をコードしている。フィブリリン-1微小線維は成長因子の生体内利用性を統合的に制御し、とりわけ潜在型TGF-β複合体の隔離（貯留）と、それに伴うシグナル出力を調節することで、血管・骨格・結合組織の恒常性に影響を及ぼす。こうしたマトリックス—シグナル相互作用を通じて、Fbn1は細胞外マトリックスの組織化、メカノトランスダクション、発生形態形成といった過程に関与する。フィブリリン-1機能の破綻は、実験系において微小線維症（microfibrillopathies）や、心血管リモデリングおよび筋骨格系の健全性に関連する結合組織表現型をモデル化するために広く用いられている。

fibrillin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFbn1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fbn1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fbn1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、fibrillin-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、fibrillin-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fbn1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• fibrillin-1の機能に不可欠なFbn1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fbn1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• fibrillin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびfibrillin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fbn1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  fibrillin-1 HDRプラスミド（m）および fibrillin-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFbn1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFbn1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。