Plásmido CRISPR de Activación (h) FHR-1: sc-416510-ACT

CFHR1 codifica la proteína 1 relacionada con el factor H del complemento (FHR-1), un regulador soluble de la vía alternativa del complemento que modula la actividad de la C3 convertasa y determina la amplificación de la activación del complemento en superficies del huésped y microbianas. Al competir con el factor H del complemento e interactuar con componentes del complemento, FHR-1 influye en la opsonización, la señalización inflamatoria y el manejo de complejos inmunes, conectando la vigilancia inmunitaria innata con la homeostasis tisular. La variación genética o la expresión alterada de CFHR1 se asocia con fenotipos de desregulación del complemento y se ha estudiado en contextos como el síndrome urémico hemolítico atípico, la glomerulopatía por C3, la degeneración macular asociada a la edad y otras patologías renales y oculares impulsadas por la inflamación. Como resultado, CFHR1 se utiliza ampliamente en estudios mecanísticos del control del complemento, la regulación inmunitaria extracelular y las vías de lesión posteriores.

FHR-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CFHR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FHR-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CFHR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CFHR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FHR-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CFHR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FHR-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FHR-1 en células tumorales con expresión de CFHR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.