FGF-8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403127-NIC

FGF8は線維芽細胞増殖因子8（FGF-8）をコードしており、分泌型のシグナルリガンドとしてFGFRに結合し、MAPK/ERK、PI3K–AKT、PLCγ経路を活性化して、細胞増殖・生存・遊走・系譜決定を協調的に制御します。FGF-8は、胚発生におけるパターニング（中脳—後脳の発生、頭蓋顔面形態形成、肢芽の伸長など）で重要なモルフォゲンであるほか、パラクリンシグナルを介して組織恒常性の維持にも寄与します。FGF8の発現異常やFGFR経路の過剰活性化は、複数の腫瘍において発生プログラムの改変や腫瘍性シグナル伝達ネットワークとの関連が示されています。FGF-8は受容体型チロシンキナーゼシグナルおよび下流の転写プログラムと交差するため、分化、上皮—間葉ダイナミクス、微小環境由来の増殖シグナルを扱うモデルで頻繁に研究されています。

FGF-8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FGF8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FGF8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FGF8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FGF8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。