Plásmido CRISPR de Activación (h) FGF-21: sc-401193-ACT

El gen humano **FGF21** codifica el factor de crecimiento de fibroblastos 21 (FGF-21), un miembro de la familia FGF con funciones similares a las endocrinas que regula el equilibrio energético sistémico y las respuestas al estrés por nutrientes. La señalización de FGF-21 integra programas metabólicos de hepatocitos, adipocitos y músculo, e influye en la homeostasis de la glucosa y los lípidos a través de vías mediadas por FGFR que requieren el correceptor **β-Klotho**, con modulación posterior de **MAPK/ERK** y redes transcripcionales relacionadas. Se induce con fuerza durante el ayuno, los estados cetogénicos y el estrés celular, coordinando respuestas adaptativas como la oxidación de ácidos grasos, la cetogénesis y la sensibilidad a la insulina. La expresión desregulada de FGF21 se ha asociado con trastornos metabólicos, como obesidad, diabetes tipo 2, enfermedad del hígado graso no alcohólico y fenotipos más amplios de riesgo cardiometabólico, lo que lo convierte en un nodo útil para el análisis de vías.

FGF-21 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FGF21 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FGF-21 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FGF21 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FGF21, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FGF-21. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FGF21 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FGF-21 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FGF-21 en células tumorales con expresión de FGF21 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.