Ferrochelatase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402043

概要

FECHはヒトのフェロケラターゼをコードしており、ミトコンドリア内膜に存在する酵素として、二価鉄（Fe²⁺）をプロトポルフィリンIXに挿入してヘムを生成します。これはポルフィリン／ヘム生合成経路の最終段階にあたります。フェロケラターゼはヘムの利用可能性を調節することで、赤芽球系の成熟、ミトコンドリア呼吸、酸化還元バランス、ならびにヘムタンパク質の組み立てに影響を及ぼします。FECH活性の破綻は、ポルフィリンの蓄積とヘム恒常性の異常に関連し、赤芽球性プロトポルフィリン症（EPP）との関係に加えて、ヘム需要の高い細胞におけるより広範な代謝ストレス表現型とも関連します。そのためFECHは、ミトコンドリア生物学、鉄の取り扱い、ポルフィリン代謝の分野で広く研究されており、酸化的・代謝的な攪乱に対する経路応答の解析にも用いられます。

Ferrochelatase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFECH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FECH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FECHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ferrochelataseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ferrochelataseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FECH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ferrochelataseの機能に不可欠なFECHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FECHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ferrochelatase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFerrochelatase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FECH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ferrochelatase HDRプラスミド（h）および Ferrochelatase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFECHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFECH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。