Ferrochelatase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402043-ACT

O FECH humano codifica a ferroquelatase, uma enzima associada à membrana interna mitocondrial que catalisa a inserção de ferro ferroso na protoporfirina IX para formar heme, a etapa terminal da via de biossíntese do heme. Essa atividade conecta o metabolismo das porfirinas ao manejo do ferro, à função mitocondrial e à produção de proteínas dependentes de heme envolvidas na fosforilação oxidativa, em reações do citocromo P450 e no transporte de oxigênio. A desregulação de FECH perturba a homeostase dos tetrapirróis e pode levar ao acúmulo de intermediários porfirínicos fotorreativos, com relevância para a fisiologia eritroide e hepática. Como um nó de via, a ferroquelatase é amplamente estudada em contextos que incluem estresse mitocondrial, equilíbrio redox e adaptações metabólicas a alterações na disponibilidade de heme.

Ferrochelatase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FECH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ferrochelatase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FECH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FECH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ferrochelatase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FECH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ferrochelatase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ferrochelatase em células tumorais com expressão de FECH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.