ferritin light chain CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400924-ACT

FTLはフェリチン軽鎖をコードしており、Fe(III)を貯蔵して鉄触媒による活性酸素種（ROS）の産生を抑えることで、細胞内の可動性鉄（labile iron）を緩衝するフェリチン・ナノケージの中核構成要素です。FTLは、フェリチン重鎖の働きやフェリチノファジー（ferritinophagy）と連動して鉄の隔離を調整することで、レドックスバランス、ミトコンドリア機能、酸化ストレスに対する細胞応答の制御に寄与します。フェリチンの組成や鉄の取り扱いが変化すると、フェロトーシス感受性に関連する経路に影響し、炎症シグナルや代謝ストレスシグナルを調節し得ます。FTL発現の破綻は、鉄過剰状態や、鉄恒常性の乱れと酸化障害が顕著な生物学的特徴となる神経変性疾患および血液学的表現型と関連づけられています。

ferritin light chain CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FTLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ferritin light chain CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FTL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFTL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ferritin light chainの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFTL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるferritin light chain依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFTL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるferritin light chain経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。