ferritin heavy chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418152

Visão geral

FTH1 codifica a cadeia pesada da ferritina, uma subunidade catalítica do complexo de ferritina que oxida Fe2+ a Fe3+ e permite o armazenamento seguro de ferro no interior das células. Ao tamponar o ferro lábil e limitar a formação de espécies reativas de oxigênio impulsionada pelo ferro, a FTH1 contribui para a homeostase redox, a função mitocondrial e a proteção contra danos oxidativos. A dinâmica da ferritina se cruza com vias de captação e exportação de ferro, incluindo a endocitose mediada pelo receptor de transferrina e o efluxo dependente de ferroportina, moldando as respostas celulares à hipóxia, à inflamação e ao estresse metabólico. A expressão desregulada de FTH1 ou o metabolismo da ferritina é frequentemente estudado em contextos de sobrecarga de ferro, neurodegeneração, inflamação associada a infecções e biologia tumoral, nos quais a disponibilidade de ferro influencia a proliferação e os programas de morte celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ferritin heavy chain (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FTH1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FTH1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FTH1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ferritin heavy chain.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FTH1 para a investigação da sinalização de ferritin heavy chain, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FTH1 críticos para a função ferritin heavy chain
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FTH1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ferritin heavy chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ferritin heavy chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FTH1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ferritin heavy chain Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ferritin heavy chain (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FTH1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FTH1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.