FcRn Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400689-ACT

O FCGRT humano codifica o recetor Fc neonatal (FcRn), um heterodímero relacionado com o MHC de classe I que se associa à β2-microglobulina e regula a homeostase da IgG e da albumina. O FcRn medeia a ligação dependente do pH em endossomas e a reciclagem ou transcitose de volta à superfície celular, controlando assim a degradação lisossomal e prolongando a semivida sérica dos seus ligandos. Esta via integra-se com o tráfego endocítico, a triagem para lisossomas e os processos de transporte através da barreira mucosa em compartimentos epiteliais e endoteliais. Alterações na expressão ou na função do FcRn são relevantes para a desregulação imunitária e para a biologia das doenças inflamatórias, através de efeitos na persistência da IgG, no processamento de antigénios e na distribuição tecidular.

FcRn O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FCGRT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FcRn O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FCGRT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FCGRT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FcRn. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FCGRT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FcRn no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FcRn em células tumorais com expressão de FCGRT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.