FBXO3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425412-ACT

O gene **Fbxo3** de camundongo codifica a **FBXO3**, um receptor de substrato do tipo F-box dentro dos complexos de ligase E3 de ubiquitina **SCF** (SKP1–CUL1–F-box), que ajuda a conferir especificidade à degradação proteassomal dependente de ubiquitina. Por meio da degradação regulada de proteínas de sinalização, a FBXO3 contribui para o controle de vias inflamatórias e responsivas ao estresse, incluindo a sinalização imune inata e a produção de citocinas. Alterações na atividade da FBXO3 têm sido associadas à inflamação desregulada e à homeostase imune, tornando-a relevante para estudos de biologia de infecções, fenótipos inflamatórios crônicos e limiares de sinalização específicos de tipos celulares. Como parte do circuito do sistema ubiquitina–proteassoma, **Fbxo3** também é útil para investigar como a estabilidade proteica se integra a programas transcricionais e à regulação pós-traducional.

FBXO3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fbxo3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FBXO3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fbxo3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fbxo3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FBXO3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fbxo3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FBXO3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FBXO3 em células tumorais com expressão de Fbxo3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.