FBL7 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405043-NIC

FBXL7 (FBL7) codifica uma proteína do tipo F-box, prevista para atuar como componente de reconhecimento de substrato dos complexos de ligase E3 de ubiquitina do tipo SCF (SKP1–CUL1–F-box), ajudando a direcionar proteínas selecionadas para ubiquitinação e degradação pelo proteassoma. Por meio dessa função, o FBXL7 está ligado a mecanismos centrais de proteostase que moldam a progressão do ciclo celular, as respostas ao estresse e a transdução de sinais, ao controlar a estabilidade de reguladores de vias. A perturbação de componentes do sistema ubiquitina–proteassoma e de adaptadores F-box é frequentemente associada a crescimento desregulado e a limiares apoptóticos alterados, tornando o FBXL7 um gene de interesse na biologia do câncer mecanística e em estudos de sinalização relacionados. Alterações de expressão e genômicas em FBXL7 foram relatadas em conjuntos de dados de tumores, sustentando sua relevância para investigar como o controle proteico mediado por ubiquitina influencia fenótipos celulares associados a doenças.

FBL7 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FBXL7 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FBXL7. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FBXL7. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FBXL7 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.