FAST-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406686

概要

FOXH1は、フォークヘッドボックス型転写因子FAST-1をコードしている。FAST-1はTGF-βスーパーファミリーシグナル伝達の核内メディエーターであり、SMAD2/3–SMAD4複合体と協調してNODAL／Activin応答性の転写を制御する。FAST-1は標的プロモーター上のフォークヘッドモチーフに結合し、状況依存的な転写プログラムを通じて、中胚葉・内胚葉（メセンエンドダーム）の運命決定、左右軸形成、上皮間葉転換（EMT）を制御する発生シグナルを統合する。FOXH1活性の破綻は、先天性の左右非対称性異常や胚発生初期の障害と関連づけられており、さらにTGF-β／SMADによる転写出力の変化は、浸潤や転移などの腫瘍性プロセスとしばしば関連する。細胞モデルにおいてFOXH1は、SMADの共役因子の使い分け、クロマチンへのリクルート、分化や腫瘍細胞の可塑性に影響する経路間クロストークを解析するための扱いやすい結節点となる。

FAST-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFOXH1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FOXH1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FOXH1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FAST-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FAST-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FOXH1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FAST-1の機能に不可欠なFOXH1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FOXH1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FAST-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFAST-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FOXH1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FAST-1 HDRプラスミド（h）および FAST-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFOXH1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFOXH1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。