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FANCI慢病毒激活颗粒(h) | sc-402229-LAC | 200 µl | $455.00 |
人类 FANCI 编码范可尼贫血(FA)DNA 修复网络的核心组分之一,在 DNA 复制过程中保护基因组完整性。FANCI 与 FANCD2 形成 ID2 复合体,并发生 ATR 依赖性磷酸化以及由 FA 核心复合体介导的单泛素化,从而促进下游核酸内切酶和同源重组因子的募集,以解决 DNA 链间交联以及复制叉停滞等问题。凭借其在复制叉保护、S 期检查点信号传导和修复协调中的作用,FANCI 功能异常与染色体不稳定性有关,并参与范可尼贫血及相关癌症易感综合征的发病机制。在机制研究中,可通过监测 ID2 的单泛素化、RAD51 焦点形成以及对交联剂的敏感性来评估 FANCI 活性。
FANCI 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 FANCI 表达。
FANCI 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在FANCI转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性FANCI表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 FANCI 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。