FAM26F Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405728-ACT

FAM26F codifica uma pequena proteína transmembranar implicada na biologia das células imunes e em respostas associadas ao interferão, com expressão enriquecida em linhagens hematopoéticas e induzível sob estímulos inflamatórios. Ligações funcionais descritas situam a FAM26F em processos que moldam a ativação de leucócitos, a comunicação célula–célula e os outputs de sinalização imune que se cruzam com vias impulsionadas por citocinas. Alterações na expressão de FAM26F foram observadas em contextos de doenças relacionadas com o sistema imunitário e em microambientes tumorais imunoativos, sustentando a sua utilização como marcador e como nó mecanístico em estudos de imunorregulação. Assim, a FAM26F é de interesse para investigar como programas estimulados por interferão e a sinalização associada à membrana contribuem para fenótipos imunes e para estados transcricionais associados à doença.

FAM26F O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FAM26F sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAM26F O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FAM26F em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FAM26F, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAM26F. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FAM26F nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAM26F no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAM26F em células tumorais com expressão de FAM26F silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.