FAM21C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404093

Descripción general

WASHC2C codifica FAM21C, un componente del complejo WASH que regula la polimerización de actina dependiente de Arp2/3 en los endosomas para apoyar la clasificación de carga mediada por el retromer y la tubulación endosomal. A través de interacciones con nexinas de clasificación y subunidades del retromer, FAM21C contribuye al reciclaje de proteínas de membrana y al mantenimiento de la homeostasis endolisosomal. La alteración de la función de la vía WASH puede perturbar el tráfico de receptores, el reciclaje de transportadores de nutrientes y las salidas de señalización acopladas a la dinámica endosomal. Las alteraciones del tráfico endosomal y de la regulación del citoesqueleto están implicadas en la biología del cáncer y en mecanismos neurodegenerativos, lo que hace que FAM21C sea relevante para estudios de la organización celular y de las respuestas al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FAM21C (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen WASHC2C en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del WASHC2C junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de WASHC2C tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FAM21C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en WASHC2C para la investigación de la señalización de FAM21C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de WASHC2C críticos para la función de FAM21C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de WASHC2C para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FAM21C CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FAM21C CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus WASHC2C. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FAM21C (h) y el plásmido HDR FAM21C (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología WASHC2C para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana WASHC2C definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.