FAM20C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406736-ACT

FAM20Cはゴルジ体に局在する分泌型キナーゼをコードしており、SIBLINGファミリーのメンバーやその他のマトリックス関連因子を含む多数の細胞外・分泌タンパク質上のSer-x-Glu/pSerモチーフをリン酸化する。分泌経路におけるタンパク質リン酸化の制御を通じて、FAM20Cは細胞外マトリックスの組織化、バイオミネラリゼーション、ならびに細胞—マトリックス間シグナル伝達に影響を与え、その結果として骨芽細胞分化や組織恒常性に下流の作用を及ぼす。FAM20C活性の変化と分泌リン酸化プロテオームの破綻は、骨格および歯の発生異常や、より広範な結合組織の表現型と関連づけられており、マトリックス生物学を研究するうえで重要なハブとなっている。さらに、ゴルジ体依存的な翻訳後修飾における役割により、FAM20Cは分泌、タンパク質品質管理、細胞外環境を介した細胞間シグナル伝達を制御する経路とも結び付いている。

FAM20C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FAM20Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FAM20C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FAM20C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFAM20C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FAM20Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFAM20C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFAM20C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFAM20C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFAM20C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。