FADS1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-429289-ACT

Mouse Fads1 codifica la fatty acid desaturase 1 (FADS1), una Δ5-desaturasi microsomiale che catalizza passaggi chiave nella biosintesi degli acidi grassi polinsaturi a lunga catena a partire dagli acidi grassi essenziali introdotti con la dieta. Regolando i pool cellulari dei precursori dell’acido arachidonico e dell’acido eicosapentaenoico, FADS1 influenza la composizione lipidica delle membrane e la disponibilità di substrati per la produzione di eicosanoidi e di mediatori specializzati pro-risoluzione. L’attività di Fads1 si intreccia con reti metaboliche lipidiche che coinvolgono la segnalazione PPAR, il rimodellamento dei fosfolipidi e le cascate di segnalazione infiammatoria. Una capacità di desaturazione deregolata è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi metabolica e a fenotipi legati all’infiammazione, rendendo Fads1 un bersaglio rilevante per studi sulla segnalazione guidata dai lipidi e sui meccanismi di malattia in modelli murini.

FADS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Fads1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FADS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Fads1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Fads1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FADS1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Fads1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FADS1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FADS1 nelle cellule tumorali con espressione di Fads1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.