FADS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404735-ACT

FADS1 codifica a dessaturase de ácidos graxos 1, uma dessaturase Δ5 localizada no retículo endoplasmático que catalisa etapas-chave na biossíntese de ácidos graxos poli-insaturados de cadeia longa, incluindo a conversão do ácido dihomo-γ-linolênico em ácido araquidônico e do ácido eicosatetraenoico em ácido eicosapentaenoico. Ao moldar os estoques celulares de PUFAs ω-6 e ω-3, a FADS1 influencia a composição de membranas, a produção de mediadores lipídicos e a sinalização a jusante ligada à inflamação e à homeostase metabólica. Variações ou desregulação de FADS1 têm sido associadas a perfis lipídicos alterados e à suscetibilidade a características complexas envolvendo biologia cardiometabólica e inflamatória. Em modelos celulares e teciduais, a atividade de FADS1 é comumente estudada no contexto de redes de elongação/dessaturação de ácidos graxos e de vias que governam precursores de eicosanoides e de mediadores especializados pró-resolução.

FADS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FADS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FADS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FADS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FADS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FADS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FADS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FADS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FADS1 em células tumorais com expressão de FADS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.