FADD Double Nickaseプラスミド (h): sc-400580-NIC

FADD（Fas-associated protein with death domain）は、FAS/CD95 や TNFRSF10（TRAIL 受容体）などの活性化したデス受容体をイニシエーターカスパーゼへ連結し、死誘導シグナル複合体（DISC）の形成を介して外因性アポトーシスを成立させるうえで不可欠なアダプター分子である。アポトーシス以外にも、FADD は NF-κB および MAPK 経路とのクロストークに関与し、RIPK1/RIPK3 のシグナルバランスを調節することでネクロプトーシスの制御にも寄与する。FADD の発現量やシグナル伝達の異常は、細胞生存の破綻、異常な炎症応答、腫瘍形成と関連づけられており、免疫恒常性やストレス誘導性細胞死の研究における共通の結節点となっている。これらの機能により、FADD は受容体シグナル、プロテアーゼ活性化カスケード、そしてヒト細胞における状況依存的な帰結を結びつける機構的リンクとして位置づけられる。

FADD ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FADD 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FADD内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FADDの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FADDが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。