Factor XII CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409611

概要

F12は凝固第XII因子をコードしており、これはセリンプロテアーゼ前駆体（ザイモーゲン）で、負に帯電した表面に曝露されると接触活性化経路を開始し、FXIの活性化を引き起こして内因系凝固を増幅します。活性化第XII因子（FXIIa）は、プレカリクレインの活性化とブラジキニン産生を促進することで凝固とカリクレイン–キニン系を結び付け、止血を炎症および血管透過性と連関させます。これらのカスケードを通じて、F12は血栓炎症性シグナル伝達に関与し、補体系や自然免疫経路とも交差します。FXII活性の制御異常は、血栓形成の生物学、血管性浮腫の機序、炎症性血管障害などの文脈で研究されており、F12は血液および内皮モデルにおける経路解析に有用な結節点となります。

Factor XII CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるF12遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、F12内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、F12のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Factor XIIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Factor XIIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、F12欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Factor XIIの機能に不可欠なF12エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、F12ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Factor XII CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFactor XII CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、F12遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Factor XII HDRプラスミド（h）および Factor XII HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはF12ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のF12標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。