Factor V Double Nickaseプラスミド (h): sc-404180-NIC

F5は凝固第V因子をコードしており、これは血漿中の糖タンパク質で、プロテアーゼによって第Va因子に活性化されます。第Va因子はプロトロンビナーゼ複合体内で第Xa因子の補因子として機能し、トロンビン産生とフィブリン血栓形成を加速します。第V因子の活性は、限定的なプロテオリシスおよび活性化プロテインC（APC）による不活化によって調節されており、これによりF5はプロテアーゼカスケード、リン脂質依存性の膜上での複合体形成、ならびに止血のフィードバック制御と関連づけられます。F5の遺伝学的または後天的な変化は凝固動態を変化させうるため、第V因子欠乏症や、第V因子ライデン変異に伴うAPC抵抗性など、血栓症および出血性表現型の文脈で研究されています。そのためF5は、凝固ネットワークの構造解析、内皮細胞および血小板に関連した向凝固活性の評価、さらに炎症シグナルとのクロストークの解明に広く用いられています。

Factor V ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における F5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、F5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、F5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、F5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。