EYA4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404355-ACT

EYA4 codifica um membro da família Eyes Absent (EYA) que atua como coativador transcricional e fosfatase, integrando programas transcricionais do desenvolvimento com a regulação do destino celular responsiva a sinais. EYA4 participa de redes de regulação gênica que influenciam a diferenciação, a organogênese e a manutenção de sistemas sensoriais, e pode se acoplar a vias que controlam a saída transcricional nuclear e a sinalização responsiva ao estresse. Na biologia humana, alterações na atividade ou na expressão de EYA4 têm sido associadas a fenótipos envolvendo função auditiva e cardiomiopatia, tornando-o um alvo relevante para o estudo de mecanismos de homeostase e disfunção tecidual. Pesquisadores investigam com frequência EYA4 para compreender como cofatores transcricionais e atividades de fosfatase coordenam a expressão gênica específica de linhagem e a adaptação celular.

EYA4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EYA4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EYA4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EYA4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EYA4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EYA4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EYA4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EYA4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EYA4 em células tumorais com expressão de EYA4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.