Estrogen Receptor beta Plasmide Double Nickase (h): sc-400213-NIC

L'ESR2 umano codifica il recettore degli estrogeni beta (ERβ), un recettore nucleare attivato dal legando che regola programmi trascrizionali in grado di controllare proliferazione cellulare, differenziazione, apoptosi e modulazione immunitaria in risposta agli estrogeni e a ligandi correlati. ERβ agisce attraverso i classici elementi di risposta agli estrogeni e tramite interazioni "tethered" con fattori di trascrizione, integrando la segnalazione lungo le vie MAPK/PI3K-AKT e il rimodellamento della cromatina per modellare un'espressione genica dipendente dal contesto. In molti tessuti, ERβ controbilancia la trascrizione guidata da ERα e contribuisce all'omeostasi epiteliale, alla funzione mitocondriale e alla segnalazione infiammatoria. Un'attività di ESR2 deregolata o un'espressione alterata di ERβ è stata associata a tumori ormono-responsivi, fenotipi riproduttivi e metabolici e processi neuroinfiammatori, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici della segnalazione estrogenica.

Estrogen Receptor beta Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ESR2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ESR2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ESR2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ESR2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.