ERM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430518

概要

Etv5はETSファミリーの転写因子ERMをコードしており、配列特異的な遺伝子発現制御因子として、MAPK/ERK経路および受容体型チロシンキナーゼ経路からのシグナルを統合し、増殖、分化、ならびに細胞運命決定を制御します。マウスの発生過程においてERMは、幹／前駆細胞の維持や系譜決定に関連する転写プログラムを調節することで、器官形成および組織恒常性の維持に寄与します。Etv5の活性は、セルトリ細胞機能、神経系および上皮の分化、さらに増殖因子刺激に対する適応応答を制御する経路との関連が示されています。ETV5/ERM依存性の転写ネットワークの変化を含むETS因子シグナルの異常は、臨床的転帰を示唆するものではなく、腫瘍形成、浸潤、抵抗性表現型のモデルにおいてしばしば研究対象とされています。

ERM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEtv5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Etv5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Etv5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ERMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ERMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Etv5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ERMの機能に不可欠なEtv5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Etv5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ERM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびERM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Etv5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ERM HDRプラスミド（m）および ERM HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEtv5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEtv5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。