ERK 2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400043-NIC

MAPK1は、細胞外の増殖シグナルをリン酸化を介した転写プログラムへと変換する、正統的なRAS–RAF–MEK–ERK型MAPKカスケードの中核をなすセリン／スレオニンキナーゼERK2をコードしている。ERK2は、転写因子やクロマチン関連制御因子を含む細胞質および核内の基質を介して、細胞周期の進行、分化、生存、遊走、ならびにストレス応答を制御する。ERKシグナルの破綻は、がん生物学における異常な増殖シグナルとしばしば関連し、経路フィードバックやクロストークの変化を通じて炎症性疾患や神経変性疾患の機序にも寄与する。中心的なシグナル伝達ノードとして、ERK2は経路ダイナミクス、フィードバック制御、状況依存的なシグナル出力を解析するために広く用いられている。

ERK 2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MAPK1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MAPK1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MAPK1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MAPK1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。