ERBIN Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402637-ACT

ERBIN (proteína interagente com ERBB2) é uma proteína de andaime contendo domínio PDZ que se localiza nas membranas basolaterais e coordena a montagem de complexos de receptores, o tráfego e o encaminhamento de sinais. Ela modula a atividade da via ERBB2/EGFR e faz interseção com a sinalização MAPK e PI3K ao organizar nós de sinalização próximos à membrana e ao acoplar receptores a efetores a jusante. O ERBIN também influencia a polaridade epitelial e a organização das junções por meio de interações com reguladores de polaridade e de adesão, moldando a arquitetura celular e a fidelidade da sinalização. A expressão desregulada de ERBIN ou alterações na função de andaime têm sido associadas a sinalização aberrante de fatores de crescimento e a defeitos de polaridade, relevantes para estudos mecanísticos em oncologia e em outras patologias epiteliais.

ERBIN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ERBIN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ERBIN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ERBIN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ERBIN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ERBIN. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ERBIN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ERBIN no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ERBIN em células tumorais com expressão de ERBIN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.