ER71 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404462-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ER71 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ER71ダブルニカースプラスミド（h）およびER71ダブルニカースプラスミド（h2）は、ETV2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ER71 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404462-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ER71 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404462-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトETV2は、初期発生における血管系および造血系の系譜決定を司るマスター制御因子であるETS転写因子ER71をコードしている。ER71はETSモチーフに結合して内皮細胞の遺伝子プログラムを活性化し、血管形成（vasculogenesis）、血管新生スプラウティング、内皮から造血系への転換（endothelial-to-hematopoietic transition）などの過程を駆動する。これらはVEGF/VEGFRシグナル伝達と連動する経路や、血管のアイデンティティを制御するより広範な転写ネットワークを介して進行する。ETV2/ER71活性の制御異常は、異常な内皮分化や血管リモデリング表現型と関連づけられており、発生生物学、組織の血管化、腫瘍関連血管新生の研究において重要である。ER71は内皮転写階層の上流に位置するため、ETV2を撹乱することは、下流の遺伝子ネットワークや系譜決定を解明するための直接的な足がかりとなる。
ER71 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ETV2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ETV2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ETV2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ETV2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。