Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EPI64 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407095
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EPI64 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico EPI64, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EPI64 Antibody (B-9): sc-376991
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EPI64 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-407095 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TBC1D10A codifica EPI64, una proteina attivatrice della GTPasi Rab (Rab GAP) che modula il traffico vescicolare accelerando l’idrolisi del GTP su specifici membri della famiglia Rab. Attraverso la regolazione del riciclo endocitico e del trasporto di membrana, EPI64 influenza il turnover dei recettori, l’identità dei compartimenti e la propagazione dei segnali dalla membrana plasmatica alle reti endosomiali. Questi processi si intersecano con l’organizzazione del citoscheletro e con programmi di migrazione cellulare che vengono spesso riprogrammati nella segnalazione immunitaria e in fenotipi associati al cancro. Un traffico mediato da Rab deregolato è stato collegato ad alterazioni di proliferazione, invasività e risposte infiammatorie, rendendo TBC1D10A un nodo utile per studi meccanicistici della dinamica di membrana nelle cellule umane.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EPI64 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TBC1D10A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TBC1D10A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TBC1D10A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EPI64.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TBC1D10A per lo studio della segnalazione di EPI64, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TBC1D10A critici per la funzione di EPI64
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TBC1D10A per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal EPI64 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EPI64 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TBC1D10A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal EPI64 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EPI64 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TBC1D10A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TBC1D10A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.